細胞移動アッセイ

オリス セルマイグレーションアッセイキットによる比類なき精度

オリスの細胞遊走試験キットは、ユニークな "ストッパー "バリアを特徴とする堅牢な96ウェルプレートシステムです。このバリアが特殊な検出ゾーンを作り、正確で精密な細胞遊走試験を可能にします。ストッパーを外すと、細胞は自由にこの検出ゾーンに移動し、リアルタイムの観察とデータ収集が可能になります。

細胞移動アッセイとその結果

オリス セルマイグレーションアッセイは、再現性が高く、高感度でフレキシブルなアッセイで、細胞の移動をモニターするために用いられます。 96ウェルプレート用にフォーマットされたこのアッセイ法は、ウェル外側の環状領域への細胞播種を制限するために、医療用シリコーンで作られたオリスの細胞播種ストッパーを利用します。ストッパーを外すと、各ウェルの中央に直径2mmの播種されていない領域(検出領域)があり、そこに細胞が移動する。

オリス検出マスクはプレート底面に適用され、検出ゾーンの可視化を制限し、移動した細胞のみを検出できるようにします。

細胞移動実験にオリスを選ぶ理由

オリスの細胞移動アッセイキットは、比類のない再現性、正確性、精密性を提供し、論文発表に耐えうる高品質なデータを求める研究者に最適なアッセイキットです。オリスアッセイと従来のスクラッチアッセイのパフォーマンスを比較し、その違いをご確認ください。

オリス細胞移動アッセイとスクラッチアッセイで収集したデータの比較

もっと詳しく オリス細胞移動アッセイとスクラッチアッセイの比較

オリス社のセルマイグレーションアッセイを使用することで、以下のような特徴と利点が得られます:

  • メンブレン・フリー・マイグレーション - 膜貫通インサートを操作することなく研究を行うことができる。
  • 再現性のある結果 - 独自の設計により、ウェル間CV<12%が得られる。
  • 細胞の形態を保持 - 細胞構造の変化をリアルタイムでモニターする。
  • 多用途 - 顕微鏡、デジタルイメージャー、または蛍光マイクロプレートリーダーを使用して、単一ウェル内の複数のプローブを使用してデータを解析する。
  • フレキシブル - 特別な装置を使用することなく、動態的または終点的な細胞遊走アッセイを行うことができる。

オリスの細胞移動キットを使った迅速で簡単な実験

当社のキットはすべての接着性細胞株と互換性があり、組織培養、フィブロネクチン、コラーゲンIなどの様々な細胞外マトリックスでコーティングされたウェルが付属しています。さらに、当社のアッセイはプレートリーダーやハイコンテントアナライザーとシームレスに連動し、迅速な細胞遊走の定量が可能です。

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オリスの細胞遊走試験システムは、接着性細胞培養用にデザインされています。このアッセイはHT-1080、PC-3、A549、NCI H1650、MDA-MB-231、NMuMG、3T3-Swiss albino、HCEC、HUVEC、MCF10A細胞株で成功裏に使用されています。

オリスの細胞遊走アッセイは、市販の染色やラベリン グ技術と共に使用できるようにデザインされている。読み出しは顕微鏡またはマイクロプレートリーダーで行うことができます。

オリスの細胞移動アッセイキットは、アカデミア、製薬業界を問わず、化合物スクリーニング、創傷治癒、癌研究などの研究をサポートする汎用性の高いキットです。

製品オプション

シングルプレートキット:

商品説明
細胞移動アッセイ|組織培養処理|96ウェル今すぐ購入
細胞遊走試験|コラーゲンコート|96ウェル今すぐ購入
細胞移動アッセイ|フィブロネクチンコーティング|96ウェル今すぐ購入

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5つのプレートキット:

商品説明
細胞移動アッセイ|組織培養処理|5×96ウェル今すぐ購入
細胞移動アッセイ|コラーゲンコート|5×96ウェル今すぐ購入
細胞移動アッセイ|フィブロネクチンコーティング|5×96ウェル今すぐ購入

もっと詳しく 表面コーティングは細胞移動に影響するか?

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デモンストレーション細胞移動アッセイの実施

オリスFLEXとユニバーサルキットによる最高の柔軟性

FLEXおよびUniversalキットには、独自のコーティングを施すなど、さらなるカスタマイズオプションがあります。

ビデオ ユニバーサル組立キットのセットアップ

商品説明
FLEXキット
96ウェルプレート4枚+ストッパー96個(未挿入)
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ユニバーサルキット
96ウェルプレート1枚+96ストッパー(未挿入)
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ユニバーサルキット
96ウェルプレート5枚+ストッパー480枚(未挿入)
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オリスの細胞遊走試験キットを用いた研究

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よくある質問

なぜボイデンチャンバー/トランスウェルアッセイよりもオリスアッセイの方が優れているのですか?

オリスアッセイは、細胞が通過しなければならない人工膜がないため、ボイデン/トランスウェルアッセイよりも生理学的により適切な環境を提供する。さらに、オリスアッセイでは顕微鏡観察の妨げとなる膜がないため、細胞の動きをリアルタイムでモニターすることができます。これはより多くの情報を提供するだけでなく、アッセイを観察するだけでエンドポイントが明らかになるため、メソッド開発を加速させます。

ボイデン/トランスウェルアッセイでは、細胞は2D表面に播種され、細胞生理を大きく変化させるが、オリス3D包埋浸潤アッセイは、アッセイを通して細胞が3Dに包埋されるため、細胞浸潤に関するボイデン/トランスウェルアッセイよりもさらに優れている(例えば、以下の文献を参照)。 1,2,3,4,5,6,7,8).

なぜオリスアッセイはスクラッチアッセイよりも優れているのですか?

オリスの細胞遊走アッセイは細胞を傷つけません。さらに重要なことは、均一な無細胞検出領域により、スクラッチアッセイよりもはるかにロバストな統計が得られることである。 本書 そして このアプリケーションノート をイラストにした。

自分でプレートをコーティングするには、ストッパーを外してプレートをコーティングし、それからストッパーを戻すのですか?

いいえ。プレートをご自身でコーティングされる場合は、オリスのユニバーサルセルマイグレーションアセンブリーキットをお勧めします。これらのキットにはプレートとストッパーが別々に梱包されています。お好きなようにプレートをコーティングし、実験開始直前にストッパーを挿入してください。

私の細胞株はOris Cell Migration Assayでテストされましたか?

オリス マイグレーション、オリス インベイジョン、オリス プロ マイグレーション、オリス 3D Embedded Invasionアッセイは、ほとんどの接着細胞株で使用できるようにデザインされています。非付着細胞もオリス3D埋め込み浸潤アッセイに使用することができます。プラティパスではHT-1080、MDA-MB-231、PC3、HUVEC細胞を用いたオリス製品のテストを数多く成功させてきました。他の多くの細胞株も、お客様のようなお客様によってオリスと共に使用されています。 グーグル・スカラー で検索すると出てくる。

各ウェルに何個の細胞を播種すればよいですか?

実験開始時に、細胞排除ゾーンの周囲に95-100%のコンフルエントな単 層ができるようにする。高い密度で播種すると、アッセイ開始時に検出ゾーンに 細胞が入る可能性があり、低い密度で播種すると、遊走後に検出 ゾーンに移動する細胞が少なくなります。通常、オリスおよびオリスプロ96ウェルプレートでは1ウェルあたり20,000~75,000個、オリスプロ384ウェルプレートでは1ウェルあたり2,500~10,000個の細胞を播種します。最初の実験では、Appendix 1に記載されているように、数種類の細胞播種密度をテストすることをお勧めします。 アッセイプロトコル.

オリスの3D 封入浸潤アッセイでは、ウェル当たり30,000 ~ 50,000個の細胞播種を推奨します。細胞株によっては、1ウェルあたり75,000 個もの細胞を播種する場合もありますが、多くの浸潤性細胞株はマトリックスメタロプロテアーゼを高濃度に発現しており、細胞密度が高いとコラーゲンが崩壊したり、液状化したりするほど分解されます。細胞数を減らせば、この問題は改善される。

どのくらいの期間、細胞が移動したり侵入したりするのを待つべきか?

最良の統計のためには、無処置細胞が検出ゾーンの元の開口部 の少なくとも2/3を閉鎖し、100%閉鎖以下になるアッセイ時間を選 択する。オリスCell Migration and Invasion Assaysの利点は、培養期間中いつでも細胞の移動量を確認できることです。初めてオリスアッセイを行う時は、定期的に顕微鏡で細胞を観察し、移動/浸潤の程度を評価し、適切な移動の程度が観察されたら実験を中止して下さい。

細胞の移動速度は細胞種によって大きく異なるので、最適な培養 時間は細胞種によって異なる。遊走時間は16~72時間、浸潤時間は1~6日である。長時間の実験には、48~72時間ごとに新しい阻害剤で培地を交換することを推奨する。

アッセイプレートの一部だけを使用し、他のウェルを後の実験に使用することはできますか?

オリスのキットは1回の実験に使用するように構成されている。オリスの場合、再現性のある緊密な排除領域を形成する完璧な構造的適合を保つため、ストッパーは使用まで冷蔵保存する必要があります。OrisProの場合、インキュベーター内の湿度が未使用のウェルのゲルを水和させるため、その後の実験で排除帯のサイズとゲル溶解時間にばらつきが生じます。

1回の実験に必要なウェルの数が96ウェルより少ない場合は、96ウェルプレート4枚とストッパー24個入りが4パック入ったオリスのCell Migration Assembly Kit - FLEXをご検討ください。各プレートは1回のみ使用でき、ストッパーは4の倍数であればいくつでも使用できます。

オリスのストッパーは新しい滅菌プレートで再使用できますか?

ストッパーは、再現性のある緊密な排除領域を生み出す完璧な構造的適合を保つため、使用まで冷蔵保存する必要があります。37℃に長時間保たれたストッパーは適切にフィットせず、不規則でばらつきのある排除ゾーンになります。

オリスのアッセンブリーキットを使用する際、ストッパーが正しく挿入されているかはどうやって確認できますか?

適切に挿入されたストッパーの先端は、ウェルの底に雄牛の目のようなパターンを作ります。このブルズアイパターンを見るには、ストッパーを挿入した後にプレートを裏返し、斜めに傾けてください。透明な底面を通して、各ウェルの中央にこの雄の目パターンを見ることができます。うまく密封されなかったストッパーは、先端が適切に配置されるまで再度挿入することができます。

他で購入したプレートにオリスのストッパーを使うことはできますか?

96ウェルプレートは「業界標準」ですが、ウェルの寸法はサプライヤーによって異なります。再現性のあるタイトバウンデッドゾーンを形成するためには、ストッパーが完全にフィットしていなければならないので、オリスプレートだけが適切に機能します。

オリスのストッパーツールを使ってストッパーを外すヒントはありますか?

まず、プレートを作業面にしっかりと当てて固定する。次に、ストッパーツールの下側をプレートの上面と平行に保ちながら、ストッパーツールのツメをストッパーストリップのバックボーン上部の間にスライドさせる。最後に、ストッパーツールを垂直に持ち上げ、ストッパーを静かに取り除く。ウェルからストッパーをこじ開けるためにストッパーツールをテコのように使用しないでください。この回答は役に立ちましたか?はい / いいえ

移動前/侵入前の基準井戸はどのように設定すればよいのか?

移動/侵入前の基準ウェルは、実験ウェルにおける移動の程度を定量化するために、検出ゾーンのサイズと位置を確定するために使用される。

オリスアッセイの場合、結果を読むまでストッパーをそのままにしておくことができます。オリスプロアッセイにはストッパーがないため、この方法は適用できません。

Oris ProおよびOrisアッセイでは、リファレンスウェルを確立するための代替方法があります:
マイグレーションが始まろうとしている時間ゼロに画像を収集するだけである。
アッセイの最初に、複製ウェルまたは複製プレートに固 定剤を加える。しかし、プレート内の一部のウェルに細胞を固定する場合、この方法では固定液の蒸気にさらされる可能性があるため、固定ウェルに隣接する細胞に影響を与えるリスクがあります。
アッセイを開始する際に、シトカラシンDのような遊走阻害剤または浸 潤阻害剤を参照ウェルに加える。細胞の移動が完全に阻害されるよう、十分な阻害剤を加えるようにしてください。

関連するアプリケーションノートもご参照ください。 ここにある。

なぜアッセイ開始時に、排除ゾーンに細胞があるのですか?

オリスストッパーを取り外した後、またはオリスプロゲルを溶解した後、アッセイプレートが揺れた可能性があります。プレートを作業台からインキュベーターに移す際は注意してください。

細胞株のプレート表面への接着が悪い可能性がある。可能な解決策は以下の通りである:
TC処理プレートを使用した場合は、コラーゲンIまたはフィブロネクチンでコートしたプレートを試してみると、より接着が良くなる。
オリスアッセイを使用する場合は、培地を添加する前に細胞が接着する時間を長くとる。
オリス・プロ・アッセイを使用する場合は、細胞を播種する量を減らして、細胞がより早くプレート表面に到達するようにしてみてください。

細胞密度が高い場合は、播種する細胞を少なくして、全細胞が接着する機会を得るようにする。

いくつかのウェルで、細胞が均一に分布していませんでした。

Oris Stopper-Based Assaysの場合、細胞を播種した後、ストッパーを外す前にプレートを作業面に軽く叩き、細胞を均等に分散させます。

どの時点でオリスアッセイに被験物質を追加できますか?

オリスアッセイでは、細胞が接着してストッパーを外した後、遊走が始まる前に試験化合物を培地に加える。

オリスプロアッセイでは、BCGが溶解して細胞が接着した後、遊走が始まる前に試験化合物を添加する。
オリスとオリスプロの両アッセイにおいて、接着時間は細胞株とプレートのコーティングに依存し、接着時間があります。接着していない細胞を除去するために、試験化合物を添加する前に培地を除去し、交換してもよい。浸潤アッセイでは、化合物をコラーゲンⅠ溶液に組み込んだり、コラーゲンの上の培地に添加したりすることができる。

オリスのアッセイにおいて、細胞遊走と増殖をどのように区別できますか?

選択肢はいくつかあるが、まずは最もシンプルなものから:
細胞倍加時間より短い時間でアッセイを行い、増殖を制限する。
2.遊走や浸潤を阻害しないアクチノマイシンDのような増殖阻害剤を加える。
増殖細胞のみに見られるマーカーである抗Ki67抗体で免疫染色し、結果からKi67陽性細胞を割り引く。
ビデオ顕微鏡でアッセイをモニターし、アッセイ中の各細胞の履歴を確認する。これは時間がかかり、高価な装置を必要とするデータ量の多いアプローチである。

オリスアッセイで遊走/侵入細胞をどのように染色すればよいですか?

特に位相差光学系があれば、染色しなくても明視野光学系で細胞は通常見える。しかし、染色は細胞を見やすくし、明視野光学系では不可能な生理学的状態を明らかにすることができます。オリスアッセイでは染色法の選択に制限はなく、必要に応じて複数の染色法を同時に使用することができます。
面積閉鎖による遊走/浸潤の定量には、検出器のシグナルを最大にするため、TRITC-ファロイジンなどの蛍光細胞質染色を推奨する。

細胞数をカウントして遊走/浸潤を定量化するには、DAPI のような核染色を推奨する。染色を核に限定することで、細胞質染色よりも撮影対象が小さくなり、個々の細胞間の分離がよくなるため、より正確な計数が可能になる。

オリスアッセイで播種する前に細胞をプレラベリン グすることも考えられる。しかしながら、染色によっては遊走や浸潤に影響を与え、実験的アーチファクトを引き起こす可能性がある。

オリスとオリスプロのプレートの寸法は?

オリス細胞移動アッセイに使用したプレートの寸法

知的財産

オリスのテクノロジーは、米国特許7,842,499、8,268,614、8,512,974と出願中の特許によって保護されています。