Las 5 razones principales del fracaso de los ensayos celulares

En el dinámico ámbito de la investigación biológica, los ensayos celulares son herramientas fundamentales para desentrañar los misterios que residen en los niveles celular y molecular. Estos ensayos, fundamentales en el descubrimiento de fármacos, la toxicología y otros campos, se diseñan meticulosamente para medir las respuestas celulares en diversas condiciones. Sin embargo, el camino hacia la obtención de resultados precisos y fiables suele estar sembrado de obstáculos imprevistos. Una ligera desviación en el protocolo o una contaminación minúscula pueden hacer fracasar un ensayo y echar a perder horas de trabajo y recursos.

En esta guía exhaustiva, profundizamos en las 5 razones principales que conducen a fallos en los ensayos celulares. Al comprender estos errores comunes, los investigadores pueden dotarse de los conocimientos necesarios para sortear estos problemas, reforzando así la precisión y fiabilidad de sus resultados. Por lo tanto, tanto si es un investigador experimentado como un novato en este campo, comprender estos factores puede aumentar significativamente la tasa de éxito de sus ensayos celulares.

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#1 - Contaminación biológica

Contaminación derivada de una manipulación descuidada del material o de las placas de cultivo celular..

La contaminación puede producirse por medios químicos o biológicos. Para evitar la contaminación, el científico debe realizar una limpieza rutinaria de todos los equipos, suelos y mostradores. Cuando se trabaja con productos químicos, conviene asegurarse de que todas las tapas están bien cerradas antes de transportar un recipiente. Cuando trabaje con células, asegúrese de evitar la contaminación cruzada trabajando con una línea celular cada vez y cambiando las puntas de pipeta cuando sea necesario.

Técnica aséptica incorrecta.

Adecuado técnica aséptica incluye la limpieza de todas las superficies del laboratorio celular, incluido el exterior de la campana de cultivo celular. La campana debe rociarse con alcohol 70% y sólo deben introducirse en ella materiales estériles. Deben llevarse guantes en todo momento y rociarse siempre con alcohol 70% al entrar en la campana. Todo el trabajo en la celda debe realizarse en la campana para mantener el entorno de la celda lo más limpio posible.

#2 – Condiciones de almacenamiento inadecuadas

Placas, células, reactivos y equipos no almacenados a las temperaturas recomendadas.

Es importante investigar la temperatura y las condiciones en las que deben almacenarse todos los reactivos y líneas celulares. Un almacenamiento inadecuado de los reactivos puede hacer que sus componentes dejen de tener los efectos deseados, con lo que el reactivo dejaría de ser útil. Las líneas celulares son todas diferentes, por lo que conocer la temperatura y las condiciones adecuadas para mantener el crecimiento de las líneas celulares es clave para cualquier experimento. También es una buena práctica comprobar periódicamente las condiciones de todos los frigoríficos, congeladores e incubadoras para asegurarse de que todos los sistemas funcionan correctamente y evitar poner en peligro cualquier experimento o reactivo.

#3 - Técnica de pipeteado

Técnicas de pipeteo inadecuadas; Ejecución deficiente de los pasos de lavado

Al pipetear, por ejemplo durante una etapa de lavado, es importante no dispensar el líquido de forma demasiado agresiva.

Un pipeteo enérgico aumentará las posibilidades de que se desprendan las células que estaban adheridas a la superficie de la placa. Si las células se desprenden de la placa y luego se lavan, el experimento se verá comprometido. Si realiza un paso de lavado, nos parece útil no apuntar la punta de la pipeta directamente a la superficie de la placa donde están adheridas las células. En su lugar, puede orientar la punta hacia la pared del pocillo para reducir el impacto de la fuerza. Si debe dirigir la solución directamente al fondo de la placa, recuerde ser cuidadoso con las células.

#4 - Mala salud celular

Cultivos celulares que no están en el rango óptimo de pasaje; Toxicidad celular por un rango incorrecto de concentración de fármacos; Crecimiento deficiente por una concentración inadecuada de suplementos.

Parte de las condiciones de una línea celular son los medios y los aditivos suplementarios. Las líneas celulares requieren una mezcla única de medios y aditivos para proporcionar la nutrición adecuada para un crecimiento celular saludable. Asegúrese de investigar qué combinación es la más adecuada para la línea celular elegida. Cuando realice un experimento utilizando distintos niveles de concentraciones de fármaco, asegúrese de encontrar el intervalo deseado en el que exponer las células. Un pipeteo incorrecto o unos cálculos erróneos pueden hacer que la concentración se desvíe de la deseada, modificando así el comportamiento de las células en esas condiciones.

#5 - Adhesión celular deficiente

Elección incorrecta del tipo de célula (utilización de células que necesitan períodos de fijación más largos).

Para seleccionar el tipo de célula adecuado, hay que tener en cuenta la finalidad del experimento que se desea realizar. ¿Requiere el experimento que las células se cultiven en condiciones específicas? ¿Requiere el experimento cultivos de especies específicas? ¿Cuál es el volumen de células necesario para llevar a cabo el experimento? Una vez respondidas estas preguntas básicas, el experimentador puede explorar opciones como células adherentes frente a no adherentes, líneas celulares continuas o finitas, la especie de la línea celular derivada, etc.

Elección incorrecta del recubrimiento de la placa (es decir, cultivo de tejidos frente a fibronectina frente a colágeno).

Los frascos y las placas de cultivo celular vienen en todas las formas y tamaños, por lo que puede ser confuso en cuanto a qué tipo es el más adecuado para fines específicos. Estos recipientes también pueden tratarse/revestirse con diversos sustratos, lo que añade más opciones a una lista cada vez mayor. Una vez seleccionada una línea celular, debe utilizarse el sustrato de recubrimiento adecuado que sea más compatible con las células elegidas. Esto garantizará el crecimiento y la migración adecuados de las células, así como la obtención de los mejores resultados en los experimentos.

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Conclusión

Esta aclaración de los 5 principales obstáculos en los ensayos celulares descubre aspectos intrincados que requieren una atención meticulosa. Desde los matices del pipeteo hasta la selección crítica de tipos celulares y placas, cada paso tiene una importancia capital. A medida que navegamos a través de estos escollos comunes, el camino hacia resultados sólidos y reproducibles se vuelve más claro. Al abordar estas cuestiones de frente y fomentar una cultura de precisión y concienciación, allanamos el camino para lograr ensayos celulares más satisfactorios, ampliando los límites de lo que se puede conseguir en la investigación celular.